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糞便中腸球菌SYBR GreenI熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立
目的 利用SYBR GreenI熒光定量PCR方法,建立腸球菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法,并初步應(yīng)用于糞便中腸球菌的檢測(cè).方法 根據(jù)GenBank發(fā)表的腸球菌23S rRNA基因序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)合成特異性的引物;利用構(gòu)建的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品繪制兩種標(biāo)準(zhǔn)曲線,構(gòu)建基因拷貝數(shù)、細(xì)菌數(shù)為分析指標(biāo)的定量分析模型并初步應(yīng)用于糞便標(biāo)本的檢測(cè)分析.結(jié)果 所建立的SYBR GreenI熒光定量PCR方法檢測(cè)靈敏度可達(dá)7個(gè)拷貝數(shù)/reaction.糞便樣本根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法所得的理論數(shù)值與培養(yǎng)菌值之間差異無(wú)顯著性(P＞0.05).非炎性腹瀉標(biāo)本中菌數(shù)與健康成人標(biāo)本中菌數(shù)差異無(wú)顯著性(P＞0.05).靈敏度曲線所得的數(shù)值大于菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,可能由于DNA提取過(guò)程中存在部分的損失.檢測(cè)糞便標(biāo)本結(jié)果顯示SYBR GreenI熒光定量PCR方法較平板計(jì)數(shù)法敏感、快捷、簡(jiǎn)便.結(jié)論 本研究建立了一種靈敏、特異、簡(jiǎn)便易行的腸球菌定量檢測(cè)方法.
袁杰利,YUAN Jie-li(大連醫(yī)科大學(xué),微生態(tài)學(xué)教研室,遼寧,大連,116027)
盧行安,LU Xing-an(遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局,遼寧,大連,116001)
曹滌菲,CAO Di-fei(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué),黑龍江,大慶,163319)
蔡竹,CAI Zu(大連醫(yī)科大學(xué),組織人事部,遼寧,大連,116027)
刊 名： 中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志 ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF MICROECOLOGY 年，卷(期)： 2007 19(6) 分類號(hào)： Q378.992 關(guān)鍵詞： 腸球菌 熒光定量PCR 糞便【糞便中腸球菌SYBR GreenI熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立】相關(guān)文章：
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