金黃色葡萄球菌外毒素B特異性適體的篩選及其應(yīng)用

目的:利用指數(shù)富集配基的系統(tǒng)進(jìn)化(SELEX)技術(shù),篩選能與金黃色葡萄球菌外毒素B(SEB)特異、高親和力結(jié)合的單鏈DNA(ssDNA)適體,并將該適體應(yīng)用于患者血清標(biāo)本的檢測.方法:從體外合成的96核苷酸隨機(jī)ssDNA文庫中,以羧基磁珠作為篩選介質(zhì),經(jīng)逐步PCR擴(kuò)增、篩選,獲得針對SEB的高親和力、高特異性適體;利用熒光素標(biāo)記適體測定篩選過程中各輪結(jié)合力;利用酶連接適體方法檢測適體特異性和結(jié)合力.結(jié)果:經(jīng)過13輪篩選,ssDNA文庫與SEB的結(jié)合百分率從1.1%提高到39.8%,增加了36倍;獲得的ssDNA適體(A11)針對SEB的特異性強(qiáng),與金黃色葡萄球菌表面蛋白A(SPA)結(jié)合低,并能初步識別患者血清.結(jié)論:利用SELEX技術(shù)篩選獲得了特異結(jié)合SEB的高親和力的ssDNA適體,為金黃色葡萄球菌的臨床診斷與治療奠定了基礎(chǔ).

作 者： 甘龍杰 蘭小鵬 江麗 馬立強(qiáng) GAN Long-Jie LAN Xiao-Peng JIANG li MA Li-Qiang   作者單位： 甘龍杰,江麗,GAN Long-Jie,JIANG li(福建醫(yī)科大學(xué),福州總醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)院,福建,福州,350025)

蘭小鵬,LAN Xiao-Peng(福建醫(yī)科大學(xué),福州總醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)院,福建,福州,350025;南京軍區(qū)福州總醫(yī)院,全軍醫(yī)學(xué)檢驗研究所,福建,福州,350025)

馬立強(qiáng),MA Li-Qiang(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院,全軍醫(yī)學(xué)檢驗研究所,福建,福州,350025) 

刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號： Q789  關(guān)鍵詞： 指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)   金黃色葡萄球菌外毒素B   適體  

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