人源抗狂犬病毒二硫鍵穩(wěn)定性Fv抗體片段基因的構(gòu)建與表達(dá)

目的構(gòu)建人源抗狂犬病毒二硫鍵穩(wěn)定性Fv(dsFv)抗體基因,并在原核系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)高效表達(dá),制備有活性的人源抗狂犬病毒dsFv抗體片段.方法采用PCR定點(diǎn)突變的方法,構(gòu)建抗狂犬病毒dsFv抗體的重、輕鏈(VH、VL)突變基因,Nde Ⅰ和Not Ⅰ雙酶切后分別插入pET-22b(+)表達(dá)質(zhì)粒中,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá).將VL、VH包涵體蛋白經(jīng)鹽酸胍變性,按比例混合在復(fù)性折疊緩沖液中,使二者折疊形成dsFv抗體片段.并以其母本抗體scFv作對照,對其抗原特異性和穩(wěn)定性進(jìn)行初步評價.結(jié)果在VH的第44位氨基酸和VL的第100位氨基酸引入了半胱氨酸,成功構(gòu)建了抗狂犬病毒dsFv抗體基因,并在原核系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)了對二者的高效表達(dá),VH、VL蛋白在復(fù)性緩沖液中正確折疊形成了dsFv抗體片段.結(jié)論對篩選獲得的抗狂犬病毒scFv成功進(jìn)行了穩(wěn)定性改構(gòu),制備了有活性的dsFv抗體片段,改構(gòu)以后的dsFv保持了對狂犬病毒的特異結(jié)合活性,而其在血清中的穩(wěn)定性有明顯改進(jìn),而且其熱穩(wěn)定性和抵抗尿素化學(xué)變性的能力亦大大改進(jìn).

作 者： 趙小玲 蔭俊 陳偉強(qiáng) 楊冠 張素娟   作者單位： 趙小玲(100071,北京,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所;天津軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所)

蔭俊(100071,北京,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所)

陳偉強(qiáng)(天津軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所)

楊冠(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所)

張素娟(解放軍第254醫(yī)院) 

刊 名： 解放軍醫(yī)學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY  年，卷(期)： 2006 31(2)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 狂犬病病毒   二硫鍵穩(wěn)定性Fv抗體   基因表達(dá)  

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