Caspase-3反義寡核苷酸對γ-射線誘導的HL-60細胞中caspase-3表達與細胞凋亡的抑制作用

γ-射線可誘導人髓性白血病細胞株HL-60細胞凋亡,但其機制尚未完全明了.為了觀察caspase-3在這種細胞凋亡模型中的作用,本研究設計合成針對caspase-3 mRNA 5'-非編碼區(qū)和編碼起始區(qū)的反義寡核苷酸(ASODNs),即ASODN-1和ASODN-2,以脂質體介導法將不同濃度ASODN-1和ASODN-2轉染進入HL-60細胞,γ-射線照射.應用TUNEL法觀察凋亡細胞形態(tài)學變化及檢測凋亡細胞百分率,免疫細胞化學、Western blotting和RT-PCR技術分別檢測caspase-3及其mRNA在引入ASODNs前后的表達水平,并以錯配寡核苷酸(MODN)轉染及未轉染細胞作為對照組.TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn),當ASODN-1和ASODN-2轉染終濃度≥3μmol/L時,γ-射線誘導的HL-60細胞凋亡率降低,與對照組相比均有顯著性差異(P＜0.01).免疫細胞化學結果顯示,與兩對照組相比,轉染ASODNs后各組caspase-3陽性細胞率顯著下降,陽性細胞染色減弱,其平均灰度值顯著增高(P＜0.01).Western blotting檢測顯示,轉染ASODNs組細胞caspase-3蛋白酶原表達降低,其中ASODN-1組顯著低于ASODN-2組.RT-PCR結果顯示兩對照組細胞caspase-3 mRNA均有明顯表達,轉染ASODNs后caspase-3 mRNA表達豐度降低.另外,ASODN-1抑制細胞凋亡和caspase-3表達的作用顯著強于ASODN-2(分別為P＜0.05和P＜0.01).實驗結果表明,caspase-3 mRNA ASODNs能夠抑制γ-射線照射誘導的HL-60細胞凋亡,下調caspase-3蛋白和caspase-3 mRNA的表達水平,其抑制作用在一定范圍內呈劑量依賴性.

作 者： 張曉田 宋天保 李冬民 吳曉琳 ZHANG Xiao Tian SONG Tian Bao LI Dong Min WU Xiao Lin   作者單位： 張曉田,宋天保,ZHANG Xiao Tian,SONG Tian Bao(西安交通大學醫(yī)學院環(huán)境與疾病相關基因教育部重點實驗室)

李冬民,吳曉琳,LI Dong Min,WU Xiao Lin(西安交通大學醫(yī)學院人體解剖學與組織胚胎學系,西安,710061) 

刊 名： 分子細胞生物學報  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF MOLECULAR CELL BIOLOGY  年，卷(期)： 2006 39(4)  分類號： Q2  關鍵詞： Caspase-3   反義寡核苷酸   HL-60細胞   細胞凋亡   γ-射線輻照  

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