抗轉鐵蛋白受體抗體的篩選和鑒定

目的:從全人源噬菌體抗體庫中篩選抗轉鐵蛋白受體(TfR)的抗體.方法:從HeLa細胞中提取總RNA,分兩段反轉錄TfR胞外區(qū)cDNA,經(jīng)兩輪PCR后,獲得胞外區(qū)基因.測序正確后,將其插入表達載體pPROEXTMHTa中,并在E.coli BL21(DE3)中表達.目的蛋白通過Ni-NTA金屬螯合層析柱進行純化、復性.用復性的TfR包被免疫管,從庫容為1013 cfu/L的全合成人源噬菌體單鏈抗體庫中,篩選抗TfR的抗體.結果:得到約1.9 kb的TfR胞外區(qū)基因,該基因以包涵體的形式在大腸桿菌中表達;利用純化、復性的TfR從抗體庫中篩選到了8個可與人TfR特異性結合的單鏈抗體.結論:利用TfR在大腸桿菌表達的復性產物,可以篩選到與天然TfR特異性結合的單鏈抗體.

作 者： 趙莉霞 顏冰 朱恒奇 許龍 黃培堂 ZHAO Li-xia YAN Bing ZHU Heng-qi XU Long HUANG Pei-tang   作者單位： 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所,北京,100071  刊 名： 細胞與分子免疫學雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(5)  分類號： Q813.2  關鍵詞： 人轉鐵蛋白受體   噬菌體抗體庫   篩選   單鏈抗體  

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