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核蛋白提取方法
核蛋白提取試劑盒
產(chǎn)品組成：
產(chǎn)品組成 規(guī)格 提取液A 提取液B 蛋白酶抑制劑混合物 磷酸酶抑制劑混合物
BB-3102-1
50T 10ml 10ml 250ul 250ul
BB-3102-2 100T 20ml 20ml 500ul 500ul
儲(chǔ)存條件：
蛋白提取液，磷酸酶抑制劑2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。
有效期：
一年。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
貝博核蛋白提取試劑盒提供配套試劑，適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動(dòng)物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、酶活性測(cè)定等蛋白研究。
應(yīng)用示例：
1 2 3
圖片說(shuō)明：用核蛋白提取試劑盒提取大腸組織樣本的SDA-PAGE的電泳考染照片和Western照片。圖1泳道中1、2、3分別為Marker、胞漿蛋白、核蛋白樣本。圖2為以上樣品的GAPDH內(nèi)參的WB結(jié)果照片。
使用方法：
細(xì)胞蛋白提取
1. 提取液制備：每200ul冷的蛋白提取液A和B中分別加入2ul蛋白酶抑制劑混
合物和磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。
①
2. 取5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，
盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。 4. 每20ul細(xì)胞壓積中加入200μl冷的提取液 A，高速渦旋振蕩15秒或吹打混勻，
置冰上15分鐘，中間每隔5分鐘渦旋振蕩或吹打混勻。
5. 再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。
6. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請(qǐng)置于冰上或-80
℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
7. 沉淀用PBS洗滌一次，然后在4℃，12000×g條件下離心5分鐘，棄上清。 8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速渦旋振蕩15秒。 9. 置冰上40分鐘，每隔10分鐘高速渦旋振蕩15秒。 10. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
11. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。
②③
12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
組織蛋白提取
1. 提取液制備：每200ul冷的蛋白提取液A和B中分別加入2ul蛋白酶抑制劑混
合物，混勻后置冰上備用。
①
2. 取適量組織樣本剪碎，加冷PBS，用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體（或
用液氮研磨），冰上靜置5分鐘，小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。 3. 在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，棄上清。
4. 每20ul細(xì)胞壓積中加入200μl冷的提取液 A，高速渦旋振蕩15秒或吹打混勻，
置冰上15分鐘，中間每隔5分鐘渦旋振蕩或吹打混勻。。
5. 再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。
6. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請(qǐng)置于冰上或-80
℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
7. 沉淀用PBS洗滌一次，然后在4℃，12000×g條件下離心5分鐘，棄上清。 8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速渦旋振蕩15秒。 9. 置冰上40分鐘，每隔10分鐘高速渦旋振蕩15秒。 10. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
11. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。
②③
12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
參考文獻(xiàn)：
● Guang Yu, Tonghai Yan et al. Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of
I2PP2A/SET in Alzheimer disease
Neurobiology of Aging 2013 （IF=6.189）
● Xiaoling Ma et al. Staphylococcal Panton-Valentine Leukocidin Induces
Pro-Inflammatory Cytokine Production and Nuclear Factor-Kappa B Activation in Neutrophils PloS one 2012 （IF=4.411）
● Jinchun Qian et al. Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
Journal of Ethnopharmacology 2010 Volume 128, Issue 2, Pages 438-445 （IF=2.466）
相關(guān)產(chǎn)品：
產(chǎn)品
總蛋白提取試劑盒 核蛋白提取試劑盒 Bradford蛋白定量試劑盒 ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞蛋白提取試劑盒 組織蛋白提取試劑盒 細(xì)菌蛋白提取試劑盒 酵母蛋白提取試劑盒 磷酸化蛋白提取試劑盒 SDS-PAGE凝膠配制試劑盒
產(chǎn)品號(hào) BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702
產(chǎn)品
磷酸化蛋白富集試劑盒 膜蛋白提取試劑盒 BCA蛋白定量試劑盒 蛋白Marker
細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒 植物總蛋白提取試劑盒 植物膜蛋白提取試劑盒 蛋白酶抑制劑混合物 磷酸酶抑制劑混合物 SDS-PAGE上樣Buffer
產(chǎn)品號(hào) BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
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