綿羊重組朊蛋白的原核表達(dá)與結(jié)構(gòu)分析

利用DNA重組技術(shù),將綿羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrPc插入表達(dá)載體pET30a,在大腸桿菌BL21(DE3)中高效表達(dá),獲得的表達(dá)產(chǎn)物為綿羊朊蛋白OvPrP(23～256).經(jīng)SDS-PAGE分析,表達(dá)產(chǎn)物以包涵體形式存在.將包涵體蛋白用8 mol/L尿素溶解,在變性條件下經(jīng)Ni-NTA柱親和層析純化,而鎳柱能競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合含有6×His標(biāo)簽的pET30a表達(dá)的目的蛋白.由于目的蛋白是在變性條件下純化的,需要將其復(fù)性后才能恢復(fù)天然構(gòu)象.采用梯度尿素透析復(fù)性后,復(fù)性率為25%左右.為了進(jìn)行重組朊蛋白的結(jié)構(gòu)分析,將重組蛋白進(jìn)行超濾濃縮,至蛋白濃度為0.4 mg/mL時(shí),采用遠(yuǎn)紫外線圓二色譜(CD)分析其二級(jí)結(jié)構(gòu),并對(duì)其高級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè).結(jié)果表明:通過Western-blotting鑒定,表達(dá)的綿羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23～256)的分子量為25172.80 u左右.經(jīng)過Jascow32軟件分析后,測(cè)得OvPrP(23～256)的二級(jí)結(jié)構(gòu)含量為:α螺旋為39.4%,β折疊為0%,轉(zhuǎn)角為0%,無規(guī)卷曲為60.6%.綿羊重組朊蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)的分析為朊病毒疾病的發(fā)生機(jī)理的探討提供科學(xué)依據(jù).

作 者： 劉美麗 趙德明 周向梅 尹小敏 LIU Mei-li ZHAO De-ming ZHOU Xiang-mei YIN Xiao-min   作者單位： 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué),國(guó)家動(dòng)物海綿狀腦病實(shí)驗(yàn)室,北京,100094  刊 名： 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE  年，卷(期)： 2006 28(6)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 綿羊朊病毒蛋白   原核表達(dá)   圓二色譜   結(jié)構(gòu)分析  

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