基于新月柄桿菌RsaA外運機(jī)制的EspA及EspA-IL-24融合蛋白胞外分泌表達(dá)研究

目的:實現(xiàn)大腸桿菌分泌蛋白(Esp)A及EspA與白細(xì)胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表達(dá),進(jìn)一步驗證基于新月柄桿菌RsaA外運機(jī)制的原核胞外分泌表達(dá)載體系統(tǒng)的有效性和通用性,并改造優(yōu)化該系統(tǒng).方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系統(tǒng)操縱子組織方式,將獲得的RsaA系統(tǒng)元件編碼序列和異源調(diào)控序列克隆至pQE30骨架質(zhì)粒,構(gòu)建新的胞外分泌表達(dá)質(zhì)粒pQABP2S;以大腸桿菌為宿主菌誘導(dǎo)表達(dá)EspA及EspA-IL-24融合蛋白,并通過Western blot檢測目標(biāo)蛋白在培養(yǎng)上清中的表達(dá).結(jié)果:獲得了新的胞外分泌表達(dá)載體pQABP2S;與對照相比,該載體宿主系統(tǒng)培養(yǎng)上清中目標(biāo)蛋白EspA及EspA-IL-24的表達(dá)量明顯增加.結(jié)論:在大腸桿菌中通過RsaA分泌系統(tǒng)可實現(xiàn)分子大小不同的EspA及EspA-IL-24融合蛋白的特異性分泌表達(dá),進(jìn)一步證實該分泌表達(dá)策略的有效性和通用性;調(diào)整調(diào)控序列以優(yōu)化分泌系統(tǒng)的嘗試,為此類基因工程技術(shù)平臺的開發(fā)提供了借鑒.

作 者： 寧亞蕾 周立雄 毛旭虎 張衛(wèi)軍 程琰 余抒 鄒全明 NING Ya-Lei ZHOU Li-Xiong MAO Xu-Hu ZHANG Wei-Jun CHENG Yan YU Shu ZOU Quan-Ming   作者單位： 寧亞蕾,毛旭虎,張衛(wèi)軍,程琰,余抒,鄒全明,NING Ya-Lei,MAO Xu-Hu,ZHANG Wei-Jun,CHENG Yan,YU Shu,ZOU Quan-Ming(第三軍醫(yī)大學(xué),臨床微生物及免疫學(xué)教研室暨重慶市生物制藥工程技術(shù)研究中心,重慶,400038)

周立雄,ZHOU Li-Xiong(香港大學(xué),醫(yī)學(xué)院,香港) 

刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 新月柄桿菌   RsaA分泌系統(tǒng)   大腸桿菌分泌蛋白A   白細(xì)胞介素-24   分泌表達(dá)   表達(dá)載體   大腸桿菌  

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