人類α-actin 啟動(dòng)子真核表達(dá)載體的構(gòu)建及應(yīng)用

利用PCR技術(shù)克隆了人類α-actin基因的啟動(dòng)子(約450bp),嘗試用去掉啟動(dòng)子的pEGFP-N1作為框架結(jié)構(gòu),成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體pEGFP-N1-α-actin-P.應(yīng)用Lipofectamine 2000將所構(gòu)建的pEGFP-N1-α-actin-P轉(zhuǎn)染入小鼠ES細(xì)胞.通過比較,發(fā)現(xiàn)在本實(shí)驗(yàn)室條件下,質(zhì)粒DNA濃度以3.0～5.0 μg/mL,轉(zhuǎn)染時(shí)間約在2～3 h最佳.200 μg/mL 的G418較適宜于靶細(xì)胞的轉(zhuǎn)染與篩選.得到表達(dá)心肌α-actin和GFP的小鼠ES細(xì)胞,基本維持小鼠ES細(xì)胞的形態(tài).PCNA染色結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染后的小鼠ES細(xì)胞具有增殖能力.α-actin抗體免疫組化染色結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞表達(dá)α-actin和GFP,揭示構(gòu)建的真核表達(dá)載體pEGFP-N1-α-actin-P轉(zhuǎn)染小鼠ES細(xì)胞,可能促進(jìn)其向心肌細(xì)胞分化并對(duì)其篩選.

作 者： 楊玉艾 孫永科 華進(jìn)聯(lián) 竇忠英 YANG Yu-ai SUN Yong-ke HUA Jin-lian DOU Zhong-ying   作者單位： 西北農(nóng)林科技大學(xué),陜西省干細(xì)胞工程技術(shù)中心,楊凌,712100  刊 名： 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA  年，卷(期)： 2006 37(11)  分類號(hào)： Q813  關(guān)鍵詞： 人類α-actin啟動(dòng)子   真核表達(dá)載體   小鼠ES細(xì)胞   心肌細(xì)胞  

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