人IP-10蛋白原核表達(dá)及其活性鑒定

目的 構(gòu)建人His標(biāo)記的γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10 (interferon-γ-inducible protein 10, IP-10)融合蛋白表達(dá)載體并在原核細(xì)胞中表達(dá)、純化,獲得有活性的IP-10蛋白,為進(jìn)一步研究其在炎癥過(guò)程中的作用機(jī)制及尋找新的抗炎途徑提供基礎(chǔ).方法 從人肺cDNA文庫(kù)中PCR擴(kuò)增無(wú)信號(hào)肽的IP-10基因編碼序列,構(gòu)建重組載體pET-14b/IP-10;重組質(zhì)粒經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)菌株;經(jīng)異丙基γ-D-硫代半乳糖(IPTG)誘導(dǎo)后,用鎳離子親和層析柱純化融合蛋白,以THP-1細(xì)胞進(jìn)行微室跨膜遷移(transwell)實(shí)驗(yàn)鑒定融合蛋白活性.結(jié)果 酶切、測(cè)序鑒定重組載體pET-14b/IP-10構(gòu)建正確,并純化得到高純度的IP-10融合蛋白.而且該蛋白具有誘導(dǎo)單核細(xì)胞THP-1跨膜遷移活性.結(jié)論 成功構(gòu)建了人IP-10融合蛋白表達(dá)載體,并純化得到具有活性的IP-10融合蛋白,為進(jìn)一步研究IP-10的功能提供了重要的實(shí)驗(yàn)材料.

作 者： 邵紫韞 彭毅 SHAO Zi-yun PENG Yi   作者單位： 邵紫韞,SHAO Zi-yun(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院醫(yī)務(wù)部,武漢,430070)

彭毅,PENG Yi(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院心血管內(nèi)科) 

刊 名： 華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： MILITARY MEDICAL JOURNAL OF SOUTH CHINA  年，卷(期)： 2008 22(4)  分類(lèi)號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10   融合蛋白   細(xì)胞遷移  

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