豬胸膜肺炎放線桿菌血清1型信號(hào)標(biāo)簽誘導(dǎo)突變體庫(kù)的構(gòu)建

本研究以自殺性質(zhì)粒pUT攜帶含有信號(hào)標(biāo)簽的Mini-Tn5轉(zhuǎn)座子對(duì)豬胸膜肺炎放線桿菌血清1型菌進(jìn)行轉(zhuǎn)座誘變,構(gòu)建了帶有12對(duì)特異性信號(hào)標(biāo)簽的Mini-Tn5轉(zhuǎn)座子的pUT自殺質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到供體菌E.coliβ2155后,利用雙親本濾膜雜交法與受體豬胸膜肺炎放線桿菌血清1型菌(APP1)進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移,構(gòu)建并優(yōu)化了接合轉(zhuǎn)移體系.利用抗性和營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)平板篩選得到接合突變體,通過(guò)抗性通用引物與12個(gè)特異標(biāo)簽引物和胸膜肺炎放線桿菌毒素IV(ApxIV)鑒定引物分別對(duì)這些突變體進(jìn)行了PCR鑒定和測(cè)序驗(yàn)證.結(jié)果表明,經(jīng)過(guò)加入標(biāo)簽的MinI-Tn5轉(zhuǎn)座子可以通過(guò)接合轉(zhuǎn)移的方式從供體菌E.COliβ2155中插入到APP1基因組當(dāng)中,并成功構(gòu)建了12個(gè)含有特異信號(hào)標(biāo)簽的重組質(zhì)粒,獲得了APP1的12個(gè)轉(zhuǎn)座突變體庫(kù),經(jīng)篩選鑒定后得到561個(gè)突變株.這為研究APP1的功能基因和篩選特定突變株提供了必要的基礎(chǔ).

作 者： HE Ming-lei 赫明雷 劉慧芳 劉思國(guó) 司薇 王春來(lái) 楊金國(guó) 杜艷芬 王聃   作者單位：   刊 名： 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)  英文刊名： CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY  年，卷(期)： 2009 17(1)  分類號(hào)： S852.619  關(guān)鍵詞： 胸膜肺炎放線桿茵   轉(zhuǎn)座子   信號(hào)標(biāo)簽  

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