RNAi抑制IEC-6細(xì)胞中ERp29表達(dá)

目的構(gòu)建抑制大鼠ERp29基因表達(dá)的重組質(zhì)粒,并在IEC-6細(xì)胞中發(fā)揮作用.方法根據(jù)大鼠ERp29的基因序列,設(shè)計合成含有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的寡核苷酸片段,經(jīng)退火形成雙鏈后克隆至pAVU6+27載體質(zhì)粒中,對陽性重組子進(jìn)行酶切和測序鑒定后轉(zhuǎn)染正常IEC-6細(xì)胞,通過PCR方法對siERp29干擾片段進(jìn)行鑒定,并采用Western blot檢測ERp29蛋白水平的表達(dá)變化.結(jié)果重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后,有目的條帶出現(xiàn),提示ERp29干擾片段已克隆至pAVU6+27載體質(zhì)粒中,DNA測序結(jié)果顯示插入序列與預(yù)先設(shè)計完全一致.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染IEC-6細(xì)胞后經(jīng)G418篩選,成功獲得陽性克隆,Western blot結(jié)果顯示ERp29的蛋白水平表達(dá)顯著下降.結(jié)論成功構(gòu)建ERp29基因RNA干擾表達(dá)質(zhì)粒,并在IEC-6細(xì)胞中發(fā)揮抑制作用,這為深入研究該基因在電離輻射中的作用奠定了基礎(chǔ).

作 者： 楊媛 章波 王蒙 王軍平 粟永萍 YANG Yuan ZHANG Bo WANG Meng WANG Jun-ping SU Yong-ping   作者單位： 第三軍醫(yī)大學(xué)軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院防原醫(yī)學(xué)教研室,全軍復(fù)合傷研究所,創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶,400038  刊 名： 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE  年，卷(期)： 2006 28(11)  分類號： Q503 Q782 Q786  關(guān)鍵詞： ERp29   RNAi   IEC-6   轉(zhuǎn)染   表達(dá)  

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